Validation of the NSAID in vitro assay for biomonitoring of NSAID activities in surface waters

Abstract

Der als Werkzeug für die Umweltüberwachung von Arzneimitteln entwickelte NSAID in-vitro Assay wurde hinsichtlich seiner Eignung zum Nachweis von COX-Inhibitor-Aktivitäten in Oberflächengewässern validiert. Es wurde ein Standardverfahren basierend auf der Festphasenextraktion von wässrigen Proben etabliert. Hierzu wurde ein Probenahmeprotokoll, das für Östrogene eingesetzt wird, so modifiziert, dass eine höhere Stabilität von NSAIDs erreicht wurde. Die Sensitivität des NSAID in-vitro Assays wurde verbessert, indem Matrixeffekte minimiert und die Stabilität des Substrats Arachidonsäure erhöht wurde. Die Validierungsmerkmale Linearität, Messbereich, Genauigkeit, Präzision, und Nachweisgrenze wurden bestimmt. Das Testverfahren wurde für die Messung von 39 Oberflächenwasserproben, die zwischen Herbst 2017 und Frühjahr 2018 an EU Watch List Probenahmestellen in 14 EU-Mitgliedstaaten und 4 Schweizer Kantonen entnommen wurden, eingesetzt. Die mit dem NSAID in vitro Assay gemessenen Diclofenac-Äquivalente der Oberflächenwasserproben wurden mit den Ergebnissen der chemischen Analytik (LC-MS/MS) von Diclofenac und anderen COX-Inhibitoren verglichen. Quelle: Forschungsbericht

The NSAID in vitro assay developed as a tool for environmental monitoring of pharmaceutical effects was validated for its suitability to detect COX inhibitor activity in surface water. A standard operation procedure based on solid phase extraction of aqueous samples was established by modifying a sampling protocol for the detection of estrogens with the aim to stabilize NSAIDs in the samples. In addition, the sensitivity of the NSAID in vitro assay was improved by minimizing matrix effects and improving the stability of the substrate arachidonic acid. The validation characteristics linearity, measurement range, accuracy, precision and limit of detection were evaluated. The test procedure was used for measuring 39 surface water samples taken at EU Watch List sampling sites in 14 EU member states and 4 Swiss cantons between autumn 2017 to spring 2018. Diclofenac equivalents measured by the NSAID in vitro assay were compared with data obtained by chemical analysis (LC-MS/MS) of diclofenac and other COX-inhibitors. Quelle: Forschungsbericht

The NSAID in vitro-Bioassay – originally developed for municipal waste water samples – can now be used to detect activity of cox-inhibitors in surface waters as well. By using 44 water samples from several European countries the application range and quality of this bioassay was increased and the limit of detection is further reduced to now 12 ng diclofenac/l. In this project other characteristics like linearity, recovery and accuracy of the test were determined as well. The improved bioassay version can be used as screening tool prior to an extensive chemical analysis. Furthermore, it can be used to avoid false negative assessment and under-estimation of environmental pollutions caused by usage chemical analysis methods only.